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【求助】Western的转膜问题，高人进
shareYBY





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2008-01-24 21:26会员属性给该会员发送悄悄话回复该帖子搜索该用户发表的帖子复制帖子内容收藏该帖子
western 做了好久 屡战屡败，惨不忍睹。...想请教一下大家，用的是PVDF 膜，我的目的蛋白是65KD ，请教下面几个问题
1)转膜用的是恒流还是恒压
2)若是恒流，相应的电压大概在多少如你用的200mA转，转膜仪上的电压稳定在什么 范 围内？
3）转膜的时间
另外，我做了这么多次不管曝光有结果还是没有结果，转膜都没有一次小蛋白很完全转过去，有时候有些大蛋白都干净了 胶下面的小蛋白还有，（我是把转膜后的胶染了在脱色看转膜的效果的）
大家帮我分析一下吧 多谢了！

很高兴看到分生版第一个提问题的，非常谢谢，加1分鼓励

医园圣主 edited on 2008-07-03 22:26
• 【讨论】检验海洋问候各位朋友了
jack99



医博园版主

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2008-01-24 21:41会员属性给该会员发送悄悄话回复该帖子搜索该用户发表的帖子复制帖子内容收藏该帖子
我们转膜一般用恒压，100v，65kd可以转90分钟。
pvdf膜用前注意先用甲醇活化。转膜时在冰浴上进行。

欢迎到文献检索版学习指导
• 北京朝阳妇幼医院招聘。
chzh





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2008-06-29 17:42会员属性给该会员发送悄悄话回复该帖子搜索该用户发表的帖子复制帖子内容收藏该帖子
我用的条件是300mA，转2到3个小时都没问题。选择稳流比较好，可把电压调到200V以上，这样电流就可以上到所需的要求。因为有的电泳仪，可能会有这方面的限制。另外稳压时不可稳流，相反也如此。
我所做的，30kD到170kD都有的。

• 【讨论】经纤维支气管镜针吸活检述TBNA论坛
医园圣主



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2008-07-03 22:20会员属性给该会员发送悄悄话回复该帖子搜索该用户发表的帖子复制帖子内容收藏该帖子
1)转膜用的是恒流还是恒压
都可以，我们用的恒压

2)若是恒流，相应的电压大概在多少如你用的200mA转，转膜仪上的电压稳定在什么 范 围内？

用的200mA转，转膜仪上的电压可以变化；
如果用的恒压，转膜仪上的电流可以变化。
只能固定一个

3）转膜的时间
你可以用伯乐的，20V，18分钟没问题。用PVEF膜或NC膜都可以，转膜后染色肯定会残留一些蛋白的，这个很正常，主要是WESTRER最后的结果

还有问题，欢迎讨论
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