【专帖】实验器材的正确操作和注意事项

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【专帖】实验器材的正确操作和注意事项

jack99

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2008-02-15 19:47

第一贴：移液器的正确操作和注意事项

很多初次使用移液器的人，总以为移液器的操作非常简单，其实不然。移液器的操作是科学试验的第一步，是一个非常基础的试验操作，但绝大多数人对移液器的操作都有偏见。其实移液器的操作学问很多。不妨问问自己这么几个问题，就可以看出您的操作有无偏差。

1。您操作时是否发生过液体倒吸进入活塞？

2。您移液时是否注意确保吸嘴外壁无液体？

3。移液器使用完毕后，您是否将移液器量程调至最大值？

4。移液器使用完毕后，您是否将移液器平放在桌面上？

5。移液器在移粘稠液体和一般液体时，操作方式一样吗？

6。移液器有多少种移液方式？

移液器的使用与养护

设定容量：设定所需要的容量时应调整到大于设定容量值的 1/4 圈，再调至设定值，这样可排除机械间隙，使设定量值准确，即先将容量调节钮旋转超过目的容量值的 1/4 圈，再向下调至设定值。

吸液的操作 :
1、连接恰当的吸嘴；
2、按下控制钮至第一档；
3、将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm （视移液器容量大小而定）；
0.1-10ul 容量的移液器进入液面下1-2mm
2-200ul 容量的移液器进入液面下 2-3mm
1-5ml 容量的移液器进入液面下 3 -6mm
注：为使测量准确可将吸嘴预洗 3 次，即反复吸排液体 3 次。
4、使控制钮缓慢滑回原位； ---！！！
5、移液器移出液面前略等待 1-3 秒；
1000ul 以下停顿 1 秒
5-10ml 停顿 2-3 秒 .
6、缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。

排液的操作 :
1、将吸嘴以一定角度抵住容量内壁；
2、缓慢将控制钮按至第一档并等待约 1 － 3 秒；
3、将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净；
4、慢放控制钮；
5、按压弹射键弹射出吸嘴。

养护：
1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物；
2、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在移液器架上；
3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 ％的异丙醇消毒，再用双
蒸水清洗并晾干；
4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准；
5、发现问题及时找专业人员处理。

☆ 注意事项

1、当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞；
2、正确使用移液器吸液、排液，以达高精准度。尤其注意排液的 2) 、 3) 操作；
3、平时检查是否漏液的方法：
吸液后在液体中停 1-3 秒观察吸头内液面是否下降；如果液面下降首先检查吸头是否有问题，如有问题更换吸头，更换吸头后液面仍下降说明活塞组件有问题，应找专业维修人员修理。

4、需要高温消毒的移液器应首先查阅所使用的移液器是否适合高温消毒后再行处理。

番茄老人 edited on 2008-02-24 10:26

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• 【资源】检验与护理

番茄老人

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2008-02-15 20:16

做实验不仅仅要学会做实验，更好学会如何使用和爱护实验器材，我想这是一个前提，是想做出好结果的起码保证！

谢谢jack99版主！我想把此帖更改为细胞实验器材使用专帖，以后大家可以就实验仪器和材料的使用方法和一些注意事项更贴。

天行键，君子以自强不息地势坤，君子以厚德载物

• 【公告】严肃考风考纪维护公平公正

jack99

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2008-02-15 20:47

番茄老人的这个建议非常好！我们要积极响应！

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• 【公告】严肃考风考纪维护公平公正

jack99

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2008-02-15 21:02

第二帖：流式细胞仪操作规程

一．开机程序
1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。

二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)
1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。

三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整
1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。
2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。
3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用 +1，2，3，4获得此四个对话框。
4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDM Param选择FL2，而FL1, FL2与FL3则以对数模式Log测量；分析细胞DNA含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且DDM Param选择FL2；分析血小板表型时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Log进行测量。
5．放上待检测的样品，将流式细胞仪设定于RUN，流速可在HIGH 或LOW上。
6．在Acquisiton Control对话框中，选取Acquire，开始获取细胞。在以下的仪器调整过程中随时选取Pause，Restart以观察调整效果。未完全调整好之前不要去掉SETUP前的“”。
7．在Detectors/Amps对话框中，调整FSC和SSC探测器中的信号倍增度：PMT voltages（粗调）与Amp Gains（细调），使样品信号出现在FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。
8．在Threshold 对话框中选择适当的参数设定Threshold，并调整Threshold的高低，以减少噪音信号（细胞碎片）。一般做细胞表型时用FSC－H而做DNA时用FL2－H。Threshold并不影响检测器对信号的获取，但可改善画面质量。
9．从屏幕左列绘图工具中选取Region（区域），并在靶细胞周围设定区域线，即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10．Detectors/Amps对话框中，调整荧光检测器（FL1, FL2, FL3, FL4等）的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群，使之分布在正确的区域内。
11．在Compensation对话框中，根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色（或多色）荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为FL1+ FL2- 的细胞群却分布在FL1＋ FL2＋区域内，则需调大FL2－？％FL1中的“？”，并从FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
12．在Status对话框中可见：Laser Power:正常值—Run/Ready为14.7mW，Standby为5mW；Laser current:正常值为6Amps左右。
13．调整好的仪器设定可在Instrument Settings对话框中储存，下次进行相同实验时可调出使用，届时只需微调即可。
本计算机中已有三个名叫储存于FACStation G3 \BD Applications \CELLQuest Folder \IMM-InstrSettings及FACStation G3 \BD Files \Instrument Settings Files \CalibFile和Mast-Cell-Set的参数文件，前二者可用于分析人白细胞，后者用于分析小鼠肥大细胞。

四．通过预设的获取模式文件进行样品分析
1．从苹果标志中选择CELLQUEST，新视窗出现后从File指令栏中选择Open，打开预设的获取模式文件。
2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。
3．从Cytometer指令栏中选取Instrument Settings，在其对话框中选择Open以调出以前存储的相同实验的仪器设定，按Set 确定。
4．在Acquire指令栏中，选择Acquisition&Storage决定储存的细胞数，参数，信号道数。其中Resolution在做细胞表面标志时选择256，做DNA时选择1024。Parameter Saved…则根据不同的检测对象选择不同的参数。
5．在Acquire指令栏中，选择Parameter Description，以决定文件存储位置(folder)，文件名称(file)，样品代号以及各种参数的标记(panel)，即安排tube1，2，3…的检测参数。一般本仪器获取的数据按照检测对象的不同分别储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \IMM 和DNA 文件夹中。文件根据日期命名。
6．在Cytometer指令栏中，选择Counters，将此对话框移至合适位置，以便于随时观察events计数。
7．将样品试管放至检测区，在Acquire Control对话框中选取Acquire以启动样品分析测定。
8．微调仪器设定，待细胞群分布合适后选择Acquire Control对话框中Pause, Abort, 去除Setup前的“”，开始正式获取信号，存储数据。
9．当一定数目的细胞被测定后，获取会自动停止，并会自动存储数据。重复步骤7，继续分析下一个样品，直到所有的样品数据分析完毕。
当所有样品分析分析完毕，即换上三蒸水，并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态，以保护激光管。

五．关机程序：
1．从File中选择Quit, 退出软件，选择Don’t Save至苹果屏幕。
2．用4ml 1：10稀释的漂白水作样品，将样品置于旁位（vacuum is on），以外管吸去约2ml，在将样品架置于中位（vacuum is off），再HIGH RUN 5分钟（内管吸去2ml）。
3．改用三蒸水4ml作样品,同上处理。
4．按Prime三次。
5．此时仪器自动转为STANDBY状态，换2ml三蒸水。必须在仪器处于“STANDBY”状态 10分钟后再依次关掉计算机、打印机、主机、稳压电源，以延长激光管寿命，并确保应用软件的正常运行。

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• 【资源】“生病了”的25种说法

jack99

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2008-02-15 21:08

第三：超净工作台操作规程

一操作步骤
1 使用工作台时，应提前30分钟开机，同时开启紫外杀菌灯，处理操作区内表面积累的微生物，30分钟后关闭杀菌灯（此时日光灯即开启），启动风机。
2 对新安装的或长期未使用的工作台，使用前必需对工作台和周围环镜先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
操作区内不允许存放不必要的物品，保持工作区的洁净气流流型不受干扰。
4 操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。
5 操作区的使用温度不可以超过60℃。
二维护规程及维护方法
1 根据环境的洁净程度，可定期（一般2～3个月）将粗滤布（涤纶无纺布）拆下清洗或给予更换。
2 定期（一般为一周）对环境周围进行灭菌工作，同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂将紫外线杀菌灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效果。
3 当加大风机电压已不能使风速达到0.32m/s时必须更换高效空气过滤器。
4 更换过滤器时，可打开顶盖，更换时应注意过滤器上的箭头标志，箭头指向即为层流气流向。
5 更换高效过滤器后，应用Y09-4型尘埃粒子计数器四周边框密封是否良好，调节风机电压，使操作区平均风速保持在0.32-0.48m/s范围内，再用Y09-4型尘埃粒子计数器检查洁净度。

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• 【转载】支持尽快修改现行《中华人民共和国执业医师法》的来签名

jack99

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2008-02-15 21:10

第四：Eppendorf 5415C型台式离心机使用说明

1、本机采用三眼安全插座，使用前应接妥地线。工作时，应将本机放置在平整而结实的台面上。
2、首先查看定时器旋钮应在“0”位置，然后开启电源开关，指示灯发亮，电源即接通。
3、具体操作必须严格按如下步骤：
⑴ 打开盖板，小心将试样对称放入离心试管内。注意：对称的离心试管内必须放入同样重量的试样（用天平称量平衡！），以避免由于重量偏差较大而造成仪器损坏。
⑵ 盖上盖板。
⑶ 将定时器旋钮旋至所需的定时位置。
⑷ 调节速度旋钮至所需的速度值。
⑸工作一定时间后，定时器旋钮回复到“0”位置，离心机自动停止工作。注意：要等到转盘停止旋转后，将速度旋钮调为“0”，方可打开盖板，取出试样！
4、本机使用完毕后，必须关闭电源开关，熄灭指示灯。将本机置于干燥、通风阴凉处，并保持其清洁。

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• 【活动】医考心路

Blood

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2008-02-16 00:19

此帖创意不错啊！

• 【讨论】检验海洋问候各位朋友了

gene

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2008-02-16 15:20

第五：PE433A固相多肽合成仪操作规程

1.接通电源，确认电压为220V，高纯氮钢瓶高压>10公斤，低压为4.55公斤，特别注意避免虚假低压。
2.系统、9#瓶、10#瓶、活化腔、反应腔、装药空瓶检漏，下阀压力为11psi，上阀压力为3psi。关闭阀门后压力下降应<0.30psi/3min。装药空瓶应注意去除铝盖中央的小圆片。
3.装上合成试剂瓶，注意瓶内试剂是否够合成用量，密封圈是否合适。使计算机和主机联系上。
4.测量各合成试剂瓶的流速。调节下阀使各瓶流速符合规定值。最后计算时间修正值T。
5.在计算机上编辑多肽序列，由N端到C端。从ABI Chemistry 中选择所需的合成方法。计算机存储后，将这些资料送入主机，并在主机上改正T值。
6.主机自检后，定标黑色斑马条纹，定标值应为0-4096。
7.装上氨基酸药瓶，瓶铝盖中央的小圆铝片去掉，条码朝里，检查排放顺序是否符合编辑的多肽序列。
8.多肽合成开始前再复核前面的顺序，是否有遗漏。并检查：废液瓶是否太满，钢瓶高压、低压是否合适，上阀、下阀压力是否正确，滤片是否需更换，阀门开关是否处于press use状态。
9.按下主机菜单的begin开关，开始合成多肽。合成时室温为18-25℃。
10.合成完毕后，用9#和10#瓶的溶剂和钢瓶氮气冲洗系统。卸下所有的合成试剂瓶，并加盖密封，换上干净的空瓶。阀门开关处于Vent位置，再关主机。

• 【讨论】病例：双肾盂，双输尿管畸形

djj200365

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2008-10-25 10:47

非常好！学习了，谢谢！

• 【讨论】检验海洋问候各位朋友了

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