【讨论】MTT方法

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【讨论】MTT方法

zyl1999

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2008-01-21 12:53

看到一个关于MTT的文献，推荐大家看一下，算是新人的报道！

MTT.pdf (149.4k)

番茄老人 edited on 2008-02-24 10:11

• 【转载】医生的职称是怎么制定的？

番茄老人

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2008-01-24 09:58

细胞增殖和细胞毒性检测除了MTT外，这里再接种介绍一种:
WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan（图A)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是
水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的formazan
都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-1产生的formazan比XTT
和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验
结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(图B）。

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番茄老人

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2008-01-24 11:16

WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(如图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。主要用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。操作非常便捷，不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。 WST-8对细胞无明显毒性。加入WST-8显色后可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

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• 【讨论】反复胸闷、气短10个月余,加重伴不能平卧4个月

番茄老人

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2008-01-24 11:33

当然还有其他很多方法可以检测细胞增殖和细胞毒性实验，我们将在以后慢慢分类补充。这三种都因为价格上非常便宜，因此受到很多人的选择，国内我觉得碧云天的便宜而且质量还还行，我用过MTT和CCK-8，感觉CCK-8的效果非常好，比MTT敏感很多，MTT做不出来明显差别采用CCK-8就得到非常好的结果。
关于这三种方法的比较如下图：

（缩略图，点击图片链接看原图）

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• 【资源】公卫中级考试

春天快来

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2008-02-03 13:57

MTT方法,看看

• 【求助】超声测值是大呢还是小呢？

liu54zr

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2008-06-25 16:43

恩，碧云天和日本同仁有卖，不过相对较贵，个人感觉用起来还不错

• 【资源】EndNote.X2中文说明

彳亍子

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2008-10-16 11:49

推荐：AlamarBlue

生物学原理：
细胞增殖过程中，细胞体内的环境由氧化环境变化成还原环境，呼吸链中的NADPH/NADP, FADH/FAD, FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。AlamarBlue被细胞内吞后，在细胞质中被以上这些代谢中间体还原，最后释放到胞外。被还原AlamarBlue™的积累使培养基从无荧光的靛青蓝转变成有荧光的粉红色，通过普通分光光度仪与荧光光度仪来检测培养基中OD值和荧光强度的变化从而分析细胞增殖的情况。

与MTT法的比较
MTT Alamar Blue
溶解性脂溶性水溶性
细胞毒性有无
致癌性有无
细胞完整性破坏细胞结构细胞结构保持完整
检测方法测OD值测OD值＋测荧光强度
细胞培养方式贴壁贴壁＋悬浮

优势：
应用广泛
(1)适用于多种细胞的检测，如：细菌、酵母类、昆虫类、鱼类、
哺乳类等；
(2)适用于贴壁细胞与非贴壁细胞检测
检测方法多样
分光光度法＋荧光光度法
无细胞毒性
不影响细胞代谢；不影响细胞因子的分泌；不影响抗体的产生。
可应用于
细胞增殖试验
细胞毒性试验（细胞活性试验）
检测后的细胞还可以进行其他方面的试验
使用方便、安全水溶性，不需要固定、破碎细胞，不需要加DMSO
对人和环境没有毒性，安全可靠
稳定性好
在细胞培养基中非常稳定，因此可以持续地、在不同时间点观测同一批细胞的活性或者增殖情况
灵敏度高
可以荧光检测，其灵敏度大大提高
兼容性
1. pH: 7.0 to 7.4,
2. Phosphate buffer
3. 10% fetal bovine serum
4. pH indicator phenol red
5. RPMI 1640, DMEM.

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