【原创】小鼠间充质干细胞的分离和培养

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【原创】小鼠间充质干细胞的分离和培养

Blood

医博园版主

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2008-02-17 15:55

“骨髓间充质干细胞的分离培养方法和诱导方案征集加分活动 [精华]” 不能跟帖，顾发新贴，请版主处理。

1．小鼠处死后，70%乙醇消毒，去四肢（多用后肢）
2．  剔除肌肉，取股骨、胫骨，移至含0.5%BSA的PBS中
3．  仔细剪掉少许骨端，以注射器插入骨端，培养液冲洗骨髓腔，冲洗液收集于15ml离心管
4．  离心300g，5分钟，移液管弃上清，细胞沉淀重悬于培养液
5．  离心300g，5分钟，重悬，以106细胞/ml接种
6．  24-48小时后换液弃悬浮细胞，以后每周换液2次
7．  2-3周后达到70-80%汇合，以0.25%胰酶/1mM EDTA消化，1:3传代

培养液：DMEM-LG/DMEM-HG/α-MEM/IMDM等
血清：1. FBS （Stem cell selected for MSC cultures）
2. FBS (Invitrogen)
3. FBS (TBD)
血清与因子组合：1. 10% FBS
2. 5% FBS +5% house serum
3. 2% FBS + EGF + bFGF + PDGF + ascorbic acid
+β-巯基乙醇β-mercaptoethanol
+胰岛素-转铁蛋白-硒 insulin-transferrin-selenium
+成骨蛋白 bone morphorlogic protein

Blood edited on 2008-02-17 16:00

• 【试题】护师资格考试试题

stemcells

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2008-02-17 17:45

好的，多谢支持！很详细，很有用！

欢迎来干细胞与再生医学版交流讨论！ http://www.zhihuiyixue.com/bbs/post/page?bid=104&sty=1&age=30

• 【公告】卫生部关于修订《医师资格考试暂行办法》第三十四条的通知

xiaoyu1234

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2008-08-09 19:28

提几个问题
1小鼠处死后可以浸泡在酒精缸里5分钟，这样岂不是更彻底
2 离心我们这里都是1000转，我个人认为没必要离两次心吧
3DMEM-HG培养细胞长的太慢
4小鼠的细胞很少传代时1：3恐怕细胞长不起来

• 【讨论】08年执考分数线之猜想篇

stemcells

用心服务
医博园版主

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2008-08-09 22:41

1小鼠处死后可以浸泡在酒精缸里5分钟，这样岂不是更彻底
是可以的，但不能时间太长，否则影响细胞活力。

2 离心我们这里都是1000转，我个人认为没必要离两次心吧
我个人认为没多大必要，转速问题不大，我用1500RPM。

3DMEM-HG培养细胞长的太慢
这个没用，直接用的DMEM加10%FBS。

4小鼠的细胞很少传代时1：3恐怕细胞长不起来
早期最好1：2，后面可多点。不过也要看细胞状态的，好的时候1：4也是可以的。

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• 【共享】心血管核医学（cardiovascular nuclear medicine）

各输己键

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2008-09-18 08:15

我想知道下这样培养出来的细胞，成功率有多高啊。

谢谢。

• 【讨论】08年执考分数线之猜想篇

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